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    英國OXOID藥敏紙片使用操作流程

    發布時間: 2020-08-20  點擊次數: 182次

    Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片操作流程

     

    操作流程:

    提供的材料:Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片。

    需要但沒有提供的材料:用適當培養基製成的瓊脂平板、接種用的混懸培養基、無菌接種環和拭子、無菌鑷子、麥氏濁度標準液、培養箱、改良的氣體環境、抗生素紙片分配器、質控菌種、測量抑菌環大小的裝置和當地標準方法的判讀標準。

    方法:Oxoid藥敏紙片可能會與各種標準檢測方法一起使用,包括但不限於BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST,請參見現行的當地指南,查找特定信息,如推薦的培養基、接種物濃度水平和培養條件等。

    質控程序:建議以適當的間隔檢測質控菌株,可以在每次做試驗時進行,也可以根據國家標準機構提供的抗生素敏感性檢測指南推薦的程序。如果質控微生物對特定抗生素的檢查結果在規定的範圍以外,不得報告患者的檢查結果,並不得使用該藥敏紙片,直至確定了產生這種不一致結果的原因(例如培養基、灌裝量、接種物、培養條件、質控菌株或者藥敏紙片儲存或使用不正確)。

    限製:本產品供體外診斷使用,僅用於指示供試微生物的體內敏感性。選擇何種抗微生物藥物進行測試和報告必須由每個臨床實驗室來決定。臨床醫生負責決定使用何種抗生素對抗供試微生物,同時應考慮可能影響藥物體內活性的其它因素。

    臨床實驗室標準化協會(CLSI)方法小結(其它標準有所不同):培養基:Mueller-Hinton瓊脂用於檢測非苛養微生物。Mueller-Hinton加5%綿羊血用於檢測腦膜炎奈瑟氏菌和鏈球菌,GC瓊脂加1%規定的生長添加劑用於檢測淋病奈瑟氏菌。嗜血杆菌檢測培養基用於檢測流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌。其它苛養菌或很少檢測的細菌所用的培養基和檢測條件可在CLSI M45中找到。平板和藥敏紙片在使用前要在室溫下平衡。平板在接種細菌前不應太潮濕。

    供試微生物:采取適當的檢測方法來核實供試微生物的推測鑒定結果。采用直接菌落法或生長法製備標準化的接種物並在製備好的15分鍾內接種到平板上:生長法-用接種環蘸取3至5個形態上相似的菌落,並將其轉移到4-5 ml的胰蛋白腖大豆肉湯或

    類似培養基中。在35℃下培養2-6小時。用無菌鹽水或肉湯調整濁度,使濁度等於0.5 麥氏濁度標準(製備0.5 麥氏濁度標準液:將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl2 ·2H2O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中-將這一標準液置於暗處)。直接菌落法(葡萄球菌和鏈球菌的方法)-從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落,加入無菌鹽水或肉湯中,並製成等於0.5 麥氏濁度標準的菌懸液。

    接種:將無菌拭子浸入菌懸液中,對著試管壁旋轉按壓,擠出多餘的液體。沿著至少三個方向塗布平板表麵。應在接種的15分鍾內將藥敏紙片放到平板上。

    藥敏紙片:使用前要將藥敏紙片放置於室溫下。每塊平板推薦的試驗藥敏紙片數量如下:

    微生物:

    每塊平板推薦的藥敏紙片:

    淋病奈瑟氏菌,副流感嗜血杆菌,流感嗜血杆菌和鏈球菌

    140-150 mm的平板上要9張藥敏紙片,或者90-100 mm的平板上要4張藥敏紙片

    腦膜炎奈瑟氏菌

    140-150 mm的平板上要5張藥敏紙片,或者90-100 mm的平板上要2張藥敏紙片

    非苛養菌

    140-150 mm的平板上要12張藥敏紙片,或者90-100 mm的平板上要5張藥敏紙片

    在貼上藥敏紙片的15分鍾內翻轉平板,並按照下麵的規定培養

    微生物:

    培養要求:

    流感嗜血杆菌和副流感嗜血杆菌

    5% CO235±2℃16-18小時

    淋病奈瑟氏菌

    5% CO236±1℃20-24小時

    腦膜炎奈瑟氏菌

    5% CO235±2℃20-24小時

    非苛養菌*

    需氧,35±2℃16-18小時

    鏈球菌

    5% CO235±2℃20-24小時

    *葡萄球菌和腸球菌需要培養24小時。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在溫度超過35℃的條件下檢測不出來。

    判讀:培養後,測量細菌生長完全抑製區域的直徑,到mm。抑菌環的邊緣應為肉眼可以發現的無明顯微生物生長的區域。血平板的結果利用反射光從平板的上表麵讀取(不用讀取溶血環的邊緣,而是細菌生長的邊緣)。所有其它培養基要使用黑色背景和反射光從平板的背麵判讀(葡萄球菌和腸球菌除外,它們采用投射光讀取-有微弱的生長表明有耐藥性)。如果是變形杆菌,忽略在明顯的抑菌環上生長的一層薄薄菌膜。對結果進行判讀的完整說明可依照CLSI方法,請參考現行的CLSI M100標準。下表隻詳細說明了在CLSI標準中的那些藥物/濃度。與其它標準方法一起使用的其它藥物和濃度可從Oxoid獲得,但沒有在本說明書中詳細列出。

    *部分摘自CLSI文件M100-S20(M02-A10):“藥敏紙片擴散法補充表”抗微生物藥物敏感性試驗性能標準。可從臨床和實驗室標準化協會(940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807)獲得完整的標準。

     

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